家蚕新的卵色相关基因Bmwh2的克隆、组织表达与功能研究

摘要

腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporter,ABC)是古老而庞大的家族,广泛分布在从细菌到人类各种生物体中,主要利用ATP水解释放能量实现多种底物的跨膜主动转运。通过反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 克隆了家蚕ABC转运子Bmwh2完整的开放阅读框。生物信息学方法分析发现,Bmwh2有14个外显子和13个内含子，编码689个氨基酸残基,分子质量为77.38 kD,等电点8.42。Bmwh2 含有一个核苷酸结合域和6个α-螺旋构成的跨膜结构域,为半转运子,属于家蚕ABC转运子超家族G亚族成员。半定量RT-PCR方法分析Bmwh2在家蚕5龄第3天幼虫的不同组织的表达水平,以精巢中的表达量相对最高。通过显微注射仪，用合成的siRNA注射胚胎发育时期的蚕卵，对Bmwh2进行干涉研究,获得了白卵和嵌合体的干涉表型。根据实验结果,初步推测Bmwh2可能参与家蚕体内色素或浆液膜色素前体的转运。