海蛇蛇毒肽TR220的抗炎活性研究

摘要

目的：本研究拟从青环海蛇蛇毒中筛选获得一类以TNFR1为特异性靶点的抗炎活性肽,并从分子、细胞和动物水平对其抗炎能力进行评价,为进一步研究抗炎候选药物奠定基础。方法：利用T7 Selectl0-3 Orient Express cDNA Cloning System构建了滴度为2.5×106pfu的青环海蛇蛇毒毒腺噬菌体展示文库;并建立了使用TNFR1淘选海蛇蛇毒抗炎活性成分的方法，获得了一种海蛇蛇毒肽TR220; BIACORE分析发现海蛇蛇毒肽TR220可直接与偶联在芯片上的TNFR1,TNFR2及TNF-a结合，解离常数(KD值)分别为32.4gM,0.22mM和2.02mM;竞争性实验表明在一定浓度范围内海蛇蛇毒肽TR220能够有效抑制TNF-a与其两种受体的结合。结果：MTT结果表明海蛇蛇毒肽TR220在一定浓度范围内对L929细胞能够呈剂量依赖地抑制TNF-a的生物活性，20nM时效果最佳(抑制率为46%，p<0.01)，且在该剂量范围内自身无明显细胞毒性。结论：BIACORE分析、细胞实验、LPS小鼠急性休克模型、DSS诱导的小鼠急性结肠炎模型等实验结果表明，海蛇蛇毒肽TR220具有显著的抗炎活性，可能是一种潜在的选择性TNF-a受体阻断剂，这为进一步研究该抗炎候选药物奠定了基础。