糖络宁含药血清对高糖环境下RSC96细胞Keap1/Nrf2/Bcl-2途径的作用机制研究

摘要

目的：针对糖尿病周围神经病变氧化应激的核心发病机制,以Keap1/Nrf2/Bcl-2途径为切入点,观察糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡的影响,探讨糖络宁防治糖尿病周围神经病变的可能作用机制. 方法：采用150mM葡萄糖培养的雪旺细胞,设立空白对照(Contro1)组,高糖(High Glucose)组,α硫辛酸含药血清(ALA)组,糖络宁含药血清(TLN)组.干预36h后,应用流式细胞仪检测高糖环境下雪旺细胞活性氧自由基和细胞凋亡,应用JC-1探针观察高糖环境下雪旺细胞线粒体膜电势(MMP),应用高内涵分析(HCA)法和Western Blot分析高糖环境下雪旺细胞Keap1/Nrf2通路中Keap1,Nrt2,HO-1和γGCS的蛋白表达的变化以及Bcl-2相关的细胞凋亡调节蛋白Bcl-2,Bax,Cyto C和Caspase-3的蛋白表达的变化. 结果：高糖干预36h后,与25mM Glucose组比较,150mM Glucose组细胞凋亡、ROS含量增加,MMP降低(P＜0.01);与150mM Glucose组比较,糖络宁含药血清能够降低细胞凋亡和ROS含量,增加MMP(P＜0.05或P＜0.01).HCA和Western Blot分析结果显示,与25mM Glucose组比较,150mM Glucose组Keap1,Nrf2,HO-1和γGCS增加(P＜0.01或P＜0.05);与150mM Glucose组比较,糖络宁含药血清能够进一步增加Keap1,Nrf2,HO-1和γGcS蛋白表达(P＜0.01或P＜0.05).与25mM Glucose组比较,150mM Glucose组Bcl-2,Bax,CytoC和Caspase-3蛋白表达增加(P＜0.01或P＜0.05);与150mM Glucose组比较,糖络宁含药血清能够增加Bc1-2蛋白表达,降低Bax,Cyto C和Caspase-3蛋白表达(P＜0.01或P＜0.05). 结论：糖络宁能够抑制高糖环境下雪旺细胞的氧化应激和细胞凋亡,与上调Keap1/Nrf2通路的蛋白表达对抗氧化应激,调控Bcl-2相关细胞凋亡通路的蛋白表达从而抑制细胞凋亡有关.