山东省动物粪便中非O157产志贺毒素大肠杆菌感染状况调查及菌株特征和耐药性分析

摘要

目的：对山东省部分地区动物粪便中的非O157产志贺毒素大肠杆菌(STEC)进行感染状况调查及菌株特征和耐药性分析. 方法：于2015-2016年,在山东省微山县、莱州市共采集1022份新鲜动物粪便标本,其中牛307份,羊300份,猪330份,鸡61份,狗等24份,共检出24株非O157产志贺毒素大肠杆菌(STEC),采用血清凝集实验对分离到的非O157STEC进行血清分型,采用抗菌药物敏感性实验探讨其对15种、六类抗生素的药物敏感性,采用双纸片协同试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测,采用PCR方法检测7种四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC、tetD)以及β-内酰胺类耐药基因(blaSHV-1、bla CTX-M、bla TEM),采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对菌株进行分子分型,评价菌株间的亲缘性和变异性,采用多位点序列分型(MLST)确定其等位基因谱及菌株序列型(Sequence type,ST),使用CLC Sequence Viewer及Conting Express生物信息软件分析不同ST序列群及菌株间的进化关系. 结果：共检出24株非O157STEC菌株,分离率为2.35％(24/1022),其中在牛粪便中检出1株,猪粪便中检出23株.毒力基因都为stx2型(100％),在牛粪中检出1株同时携带eae毒力基因的菌株(4.35％).血清型比较分散,O85：H32血清型有3株,是本次研究的优势血清型,其余血清型有2株或1株.在检测的15种抗生素中,磺胺异噁唑耐药率高达91.67％,四环素为79.17％,复方新诺明和萘啶酸均为75％,氯霉素为54.17％,对头孢吡肟、亚胺培南均敏感.检出4株产ESBLs菌株,产酶率为16.67％.24株非O157STEC检测出4种四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC、tetD).PFGE共分为17个型别(SD001-SD017),优势型别SD017有4株菌,其次SD003有3株菌.24株非O157STEC共有11种MLST型别,不同ST型别包含不同的菌株,其中ST540、ST5133型别的菌株最多,各为4株菌(16.67％);其次为ST993和ST1112,各为3株菌(12.5％),为本次研究的优势型别,其余带型各为1株或2株菌. 结论：山东省部分地区在动物粪便中检出的非O157STEC血清型比较分散,对常见的抗生素耐药率比较高,有部分菌株产生超广谱内酰胺酶(ESBLs),共得到17种PFGE带型,同源性在61.7％-100％之间,24株非O157STEC大肠杆菌菌株之间MLST具有较远的遗传关系,具有明显的分子多态性,我省应重点加强对这类菌株的监测和管理,为传染病防控提供支持.