Meyerozyma guilliermondii中烯酮还原酶的克隆表达、性质分析及其催化α,β-碳碳双键还原的研究

摘要

烯酮还原酶可以专一性地还原烯酮/酯中的碳碳双键,并引入两个手性中心,是生物催化手性合成的重要酶类之一.本研究从MeyerozymaguilliermondiiATCC6260中克隆获得了烯酮还原酶MgER基因,并在E.coliBL21(DE3)中以可溶形式表达.酶学性质研究表明,MgER为FMN结合蛋白,NADPH依赖.MgER最适温度为30°C,最适pH为7.0,其在4°C、pH7.0的环境中最稳定,放置180h后仍具有50％的酶活.底物特异性分析表明其对茶香酮、对苯醌、马来酰亚胺和N-苯基马来酰亚胺均展现出较高的活力.立体选择性分析表明其对(R)-香芹酮和茶香酮展现出严格的立体选择性.MgER可将200mM(R)-香芹酮转化为(2R,5R)-二氢香芹酮,产率为97.4％,de＞99％,时空产率达到12.18mM/h.