miR-21在鸭胚胎期胸肌发育中的功能研究

摘要

为了阐明miR-21对鸭胸肌发育的调控作用,从表观遗传学的角度探讨鸭骨骼肌发育的调控机制,本课题组在前期利用鸭转录组mircroRNAs测序技术,发现miR-21在胚胎期第19天北京鸭胸肌内显著差异高表达于其他时期,且与骨骼肌发育正向调控因子MRF4和MyoG表达趋势一致,与负向调控因子MSTN表达趋势相反.因此,提出假设miR-21对鸭骨骼肌发育具有促进作用.为了验证上述假设,本文拟就鸭miR-21的分子特征、组织和时空表达谱以及miR-21对鸭卫星细胞增殖与分化的影响进行深入研究.2材料与方法通过ClustalX软件和micro-brewer在线比对确定miR-21成熟序列及前体序列的保守性;应用qRT-PCR,研究miR-21在胚胎期北京鸭胸肌内及胚胎期第27天不同组织内的表达谱;通过细胞培养、过表达和干扰miR-21,结合qRT-PCR、WB、EdU检测、流式细胞术、免疫荧光等技术检测和探索miR-21对鸭卫星细胞增殖和分化的影响.3结果与讨论通过序列比对,发现miR-21高度保守,和其亲缘关系最近的为原鸡,其次是火鸡和斑胸草雀.miR-21高表达于胸腿肌组织、肝脏和肌胃组织;时序表达谱显示miR-21在胚胎期第19天表达量最高,胚胎发育初期和结束期表达量都较低.分离和培养鸭卫星细胞,并转染miR-21模拟物和抑制物,qRT-PCR、WB、EdU及流式细胞术检测发现miR-21促进鸭卫星细胞的增殖;qRT-PCR、WB及免疫荧光检测结果显示miR-21具有促进鸭卫星肌管形成的作用.对miR-21的研究目前主要集中在其对癌细胞增殖的影响方面,对正常发育的细胞尤其是骨骼肌细胞研究的还很少,本研究结果与Zuo等(2015)在猪骨骼肌和白立景(2014)在小鼠成肌细胞上的研究一致,在禽类上为首次研究.