狗过敏原Can f6:表达,纯化,B表位分析以及在中国狗过敏儿童中的致敏情况研究

摘要

由狗引起的过敏在全世界都很常见.不过,在中国,由狗引起的过敏情况仍然不是很清楚,尤其在儿童等特殊群体.在这项研究中,选择了Can f6,一种属于载脂蛋白的主要狗过敏原,用以研究其在中国狗过敏儿童中的过敏情况.将Can f6基因亚克隆到pET-28a载体中并转化到大肠杆菌BL21(DE3)细胞中进行表达,通过镍亲和层析纯化重组Can f6,通过SDS-PAGE电泳鉴定Can f6表达情况,并通过嗜碱性粒细胞激发试验和蛋白免疫印迹实验分析其在中国狗过敏儿童中的致敏情况.此外,通过使用一系列生物信息学方法预测了Can f6的二级结构,B细胞表位并进行了3D建模,通过间接ELISA方法检验了B细胞表位的活性.重组过敏原通过SDS-PAGE电泳显示了一条分子量为20kDa的条带,其中56.3％(18/32)的狗过敏儿童患者的血清与重组Can f6产生反应.嗜碱性粒细胞中激发实验显示狗过敏儿童嗜碱性粒细胞表面的CD63和CCR3表达量约为健康受试者的4倍.Can f6的二级结构包含3个α螺旋,9个β折叠和无规卷.预测了5个Can f6的B细胞表位,并通过间接ELISA证实了表位的活性.结果表明,Can f6对于中国儿童中来说是一个主要的过敏原,此结果为进一步研究Can f6在中国儿童狗过敏症状诊断和治疗中提供依据.Can f6的生物结构信息将有助于为Can f6相关脱敏疫苗的制备和狗过敏的治疗奠定基础.