猪圆环病毒2型交叉引物恒温扩增检测方法的建立

摘要

采用交叉引物恒温扩增技术(Cross priming amplification,CPA)原理,根据PCV2的Cap基因设计一组交叉扩增引物,用构建的Cap基因重组质粒作为标准DNA模板,对反应体系的引物浓度、Betaine、MgSO4、dNTP、Bst酶、反应温度和时间进行优化,并结合核酸试纸条技术,建立一种简便、快速、准确的现场可视化检测PCV2的交叉引物恒温扩增检测方法(PCV2-CPA).用建立的CPA检测方法、常规PCR和ELISA方法检测经IFA方法标定的127份临床样品,比较这些方法的敏感性、特异性和符合率,通过ROC曲线图可知三种检测方法中,CPA检测方法效能最优.本实验建立的PCV2-CPA检测方法仅一台水浴锅或金属浴即可完成病毒DNA的扩增,密闭的核酸检测试纸条使结果判定直观、客观,且可有效避免气溶胶污染,可应用于PCV2的现场快速检测.