山羊KLF9基因的克隆及组织细胞表达谱

摘要

本研究旨在克隆山羊Kruppel样转录因子9(Kruppel-like factor9,KLF9),阐明其在山羊细胞与不同组织中的表达模式,为进一步研究该基因对山羊肌内脂肪(Intramuscular Fat,IMF)沉积的调控作用奠定理基础.试验利用胶原酶消化法获得7日龄简州大耳羊羔羊肌内前体脂肪细胞.选成年简州大耳羊与藏山羊各4只,用RT-PCR法克隆山羊KLF9基因,用实时荧光定量PCR(Real-time fluorescent quantitative PCR,qPCR)方法检测KLF9基因在山羊背最长肌、股二头肌、臂三头肌、皮下脂肪、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏组织中的相对表达水平及KLF9基因在成脂诱导分化0d、2d、4d、6d的前脂肪细胞中的表达水平.结果显示,获得山羊KLF9基因全长891bp,其中包括CDS区735bp,5'UTR序列86bp,3'UTR序列70bp,编码244个氨基酸.山羊KLF9氨基酸序列与藏山羊相似性为99.73％,与牛、猪、人、鼠的相似性高达99.18％至97.54％.组织表达结果显示,简州大耳羊肝脏和皮下脂肪的KLF9基因相对表达量极显著高于其他各个组织(P＜0.01);藏山羊肺脏的KLF9基因表达水平极显著高于其他各个组织(P＜0.01).细胞表达检测发现,成脂诱导2d的KLF9基因表达水平极显著高于前体脂肪细胞(P＜0.01).本研究在获得山羊KLF9基因序列的基础上,发现了其组织表达模式具有品种特异性,并推测其可能在山羊前体脂肪细胞分化早期发挥调控作用.