子房注射法转化‘紫宝石’蝴蝶兰的研究

摘要

采用子房注射法对‘紫宝石’蝴蝶兰进行外源DNA导入研究,结果表明:不同时期注射和不同注射处理方式对‘紫宝石’蝴蝶兰的落果率影响不同,对胚座组织和种子的GUS染色率的影响也不同,在授粉后65d、以2％DMSO为缓冲液、注射400μg·mL-1浓度质粒时,种子的GUS染色率最高达6.14％.选取各注射时期无菌播种后获得的1000个原球茎经系列浓度的潮霉素筛选后发现,在授粉后65d进行注射时获得的抗性植株最多,为31株,转化率为3.1％.切取转化植株幼叶及幼根进行GUS检测,均为阳性;随机挑选7株幼苗进行PCR检测,均能扩增出GUS基因和HPT基因条带,说明外源基因已经整合到植株基因组内.子房注射法在‘紫宝石’蝴蝶兰转基因中的成功应用,能为兰科植物育种提供一种简单高效的途径.