10-羟基喜树碱对RAW264.7细胞分化为破骨细胞的影响

摘要

目的：探讨10-羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin10-HCPT)对破骨细胞生成的影响. 方法：体外培养RAW264.7细胞,以100ng/ml细胞核因子κB(NF-κB)受体活化因子配体(RANKL)和30ng/ml重组巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)共诱导培养,并同时添加不同溶度的10-羟基喜树碱培养5天.通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色的方法来观察诱导生成破骨细胞的数量,用Real-time PCR方法检测其破骨细胞的相关标志基因TRAP、组织蛋白酶K(CTSK)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表达.CCK-8检测10-基喜树碱对RAW264.7细胞的增殖活性作用. 结果：CCK-8检测提示一定浓度范围内(1-5ng/ml)的10-羟基喜树碱对细胞增殖活性无影响(P均=0,P＜0.05);10-羟基喜树碱可以抑制破骨细胞生成,随着药物浓度增加,破骨细胞生成数量[1ng/ml(86±11.14),2ng/ml(66.67±7.51),5ng/ml(27.67±6.51)]与对照组(145±8.19)相比明显减少(P均=0,P＜0.05);其标志性基因TRAP[1ng/ml(24.38±0.68),2ng/ml(20.09±1.86),5ng/ml(6.23±0.53)]、CTSK[1ng/ml(10.08±0.81),2ng/ml(7.30±0.30),5ng/ml(3.20±0.56)]和MMP-9[1ng/ml(43.54±6.96),2ng/ml(28.28±5.83),5ng/ml(11.07±2.53)]的mRNA表达量较单纯添加RANKL和M-CSF组相比均明显减少(P均=0,P＜0.05),且随着10-HCTP浓度增加基因的表达量成下降趋势. 结论：10-HCTP可以通过减少破骨细胞标志性基因TRAP、CTSK和MMP-9的表达来减少破骨细胞的形成.