自噬抑制剂氯喹通过抑制香叶酰香叶酰基转移Ⅰ的表达激活p53通路诱导人气道平滑肌细胞的凋亡

摘要

目的:气道平滑肌在支气管哮喘的气道重塑和气道气道高反应起关键的作用,通过气道热成形术去除气道平滑肌细胞可有效地控制哮喘发作.如何用药物来诱导气道平滑肌细胞凋亡以逆转气道重塑减轻气道高反应是目前哮喘研究的热点之一.香叶酰香叶酰基转移Ⅰ(Geranylgeranyl transferaseⅠ,GGTⅠ)是参与真核细胞内信号蛋白转录后修饰必须的一种酶,具有调节气道平滑肌细胞自噬和凋亡的作用.氯喹是一种自噬抑制剂,已应用于诱导抗药肿瘤细胞的凋亡.推测氯喹可通过抑制GGTⅠ的表达而诱导人气道平滑肌细胞凋亡.rn 方法:体外实验中采用人气道平滑肌细胞爬片,培养液中加入不同浓度的氯喹(0μM,50μM,100μM,150μM,200μM)孵育24小时,并用100μM的氯喹分别孵育0小时,12小时,24小时,48小时和72小时,TUNEL法检测人气道平滑肌细胞凋亡情况,观察氯喹诱导人气道平滑肌的凋亡效果.免疫印迹检测氯喹100μM分别孵育0小时,12小时,24小时,48小时和72小时的平滑肌细胞中p62蛋白和p53蛋白的表达水平.RT-PCR检测氯喹100μM孵育24小时和空白对照的人气道平滑肌细胞中GGT ⅠmRNA水平.rn 结果:氯喹在体外具有诱导人气道平滑肌细胞凋亡的作用且具有时间依赖性和剂量依赖性的特点;氯喹100μM孵育人气道平滑肌p62蛋白和p53蛋白的表达水平随时间的延长逐渐升高;氯喹抑制人气道平滑肌细胞的GGT Ⅰ的表达.rn 结论:首次证明自噬抑制剂氯喹通过抑制GGT Ⅰ的表达激活p53凋亡通路而诱导人气道平滑肌细胞的凋亡.氯喹类药物在慢性气道炎症引起的气道重塑方面的治疗价值值得进一步研究.