苦参碱对阿霉素诱导的肾损伤大鼠裂孔隔膜蛋白nephrin、podocin的影响

摘要

目的:探讨不同浓度苦参碱对阿霉素诱导的肾损伤大鼠的作用.方法:SD雄性大鼠行单侧肾切除术后1周尾静脉注射阿霉素5mg/kg,间隔2周追加2mg/kg建立肾小球硬化模型.108只大鼠随机分为空白对照组(A)、假手术组(B)、模型组(C)、苦参碱25mg/kg干预组(D)、苦参碱50mg/kg干预组(E)、苦参碱75mg/kg干预组(F),各18只.于造模后2、4、6周末每组各处死大鼠6只,同时检测不同时间点各组大鼠存活率,24小时尿蛋白,血清总蛋白、白蛋白,电镜观察A与C组肾组织形态学变化,RT-PCR检测各组肾组织NPHS1、NPHS2 mRNA的表达,Western-Blot检测各组肾组织nephrin、podocin蛋白的表达.结果:1.各项指标A, B组无明显差异。造模后C组与A组相比，存活率:4周开始下降，差异显著(P＜0.01);生化:尿蛋白随时间增多，血清总蛋白、白蛋白随时间降低(P＜0.05);电镜结果2周末出现微小病变，4周末出现局灶节段性肾小球硬化，6周末出现肾小球硬化;RT-PCR: 2周末NPHS1升高(P＜0.05)，4周末无明显差异，6周末显著降低(P＜0.05);NPHS2于2、4周末升高，6周末显著降低(P＜0.05);Western-Blot结果:nephrin蛋白2周末降低，4周末升高，6周末降低(P＜0.05);podocin蛋白2周末无明显差异，4周末升高，6周末降低(P＜0.05)。2.给予苦参碱干预后，与C组相比，D、E组4周末存活率达到最低谷，之后开始升高，F组存活率逐渐减低，6周末为0(P＜0.01);D、E组于6周末可改善蛋白尿及血清蛋白水平(P＜0.05)，F组加重蛋白尿水平(P＜0.05);RT-PCR:D组NPHS1,NPHS2于2、6周末增高(P＜0.05)，E组NPHS1于4、6周末、NPHS2于6周末增高(P＜0.05)，余无差异，F组NPHS1,NPHS2于2,4周末均低(P＜0.05);Western-Blot:D、E组nephrin, podocin蛋白2周末无差异，4周末低，6周末均高于C组(P＜0.05)，F组蛋白4周末明显低(P＜0.05)。结论：1.单侧肾切除加间隔2周尾静脉注射5mg/kg, 2mg/kg阿霉素于6周末出现肾小球硬化，伴随着NPHS1, NPHS2 mRNA及nephrin, podocin蛋白的一系列变化。2.25mg/kg与50mg/kg苦参碱可通过调节nephrin与podocin基因及蛋白的表达对阿霉素肾损伤起到一定的保护作用，75mg/kg苦参碱可加重肾小球硬化。