牛磺酸联合渐增再灌注对离体大鼠停灌/复灌损伤心脏保护作用的研究

摘要

目的：研究牛磺酸联合渐增再灌注对离体大鼠停灌/复灌损伤心脏的保护作用,并探讨其作用机制.方法：采用Langendorff离体心脏灌流法制备离体大鼠心肌停灌/复灌损伤模型.SD大鼠随机分为7组:正常对照组(Nor),停灌/复灌组(I/R),渐增再灌注组(GR),牛磺酸低浓度组(T20),牛磺酸高浓度组(T40),渐增再灌注联合牛磺酸低浓度组(GT20),渐增再灌注联合牛磺酸高浓度组(GT40).记录平衡末、再灌注5 min(R5min)及再灌注90 min(R90min)时的左室发展压(LVDP)、左室内压上升最大速度(+dp/dtmax)、左室内压下降最大速度(-dp/dtmax)及冠脉流量(CF),TTC染色法测定心肌梗死面积,酶标法检测冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和心肌组织caspase 3活性,分光光度法检测心肌组织总超氧化物歧化酶(SOD)、锰SOD(Mn-SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性及丙二醛(MDA)含量,免疫组化法检测心肌组织细胞间黏附分子(ICAM)-1、P-选择素的表达,凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Western blot 法检测心肌组织中p-Akt和t-Akt的蛋白表达水平.结果：与I/R组比较,GR、低、高浓度牛磺酸及渐增再灌注联合低、高浓度牛磺酸均能减轻大鼠离体心脏停灌/复灌损伤,提升R5min及R90min时的LVDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax及CF,缩小心肌梗死面积,减少LDH 漏出,增加心肌组织总SOD和Mn-SOD活性,降低心肌组织MPO活性和MDA含量,减少心肌组织ICAM-1、P-选择素的表达;降低心肌Caspase 3活性,升高bcl-2/bax比值,降低凋亡指数.相比单纯应用GR及牛磺酸,渐增再灌注联合牛磺酸的保护作用更强,且GT40组保护作用最强.Western blot结果显示,与I/R组比较,GR组、GT20组及GT40组p-Akt蛋白的表达显著增加.结论：GR和牛磺酸均能减轻大鼠离体心脏的停灌/复灌损伤,二者联合应用可产生更强的心脏保护作用,机制涉及缓解过氧化损伤、减少心肌细胞凋亡、减轻心肌组织炎症损伤及激活PI3K/Akt信号通路.