一种新的原位检测肝组织HBV cccDNA的方法

摘要

目的：建立新的原位检测肝组织中乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA(HBV cccDNA)的方法,探讨cccDNA在慢乙肝患者肝组织中的分布、定位及与肝组织病理的关系.方法：选取35例HBV感染患者病理检测剩余肝组织,包括14例慢性乙肝、4例肝硬化和l7例肝细胞癌患者,诊断标准符合《慢性乙型肝炎防治指南》(2010年版).将患者肝组织样本固定,经不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD酶)消化后,设计4对滚环引物和一对跨缺口引物,应用滚环扩增结合原位跨缺口PCR扩增技术检测肝组织中cccDNA的表达,并与传统的方法进行比较.同时应用该方法检测17例肝癌患者癌与癌旁组织cccDNA的表达分布情况,并与荧光定量PCR方法进行比较.结果：HBV cccDNA阳性信号为蓝色或紫蓝色呈团块状，定位于细胞核。肝癌患者癌及癌旁组织HBV cccDNA阳性率分别为10%( 2/20)和85%( 17/20 )，两者差异有显著性(P<0.01)。结论：成功建立了新的石蜡包埋肝组织HBV cccDNA的原位检测方法，该方法比传统原位检测方法具有较好的特异性、灵敏度和稳定性。肝细胞癌患者癌旁组织病毒复制水平高于癌组织。