低pH孵放法灭活人重组肿瘤坏死因子α融合蛋白中异嗜性小鼠白血病毒的方法学研究

摘要

重组融合蛋白常用的表达载体是中国仓鼠卵巢细胞(CHO).已知CHO细胞中存在内源性逆转录病毒.虽然该病毒对于人类不具感染性,但对于人用药的安全仍有一定风险.因此,CHO细胞来源的药用蛋白的生产必须具备灭活工艺.低pH孵放法一般用于包膜病毒的灭活.来源于CHO细胞的逆转录病毒属于具有包膜的γ型逆转录病毒。在灭活验证试验中，以异嗜性小鼠白血病病毒(Xenotropic Murine Leukemia Virus X-MulV)作为CHO细胞内源性逆转录病毒的指示病毒(又称作模拟病毒、替代病毒)，以人重组融合肿瘤坏死因子a作为待验证样本，进行病毒的灭活验证试验。以CHO细胞作为X-MulV的传代载体，培养7天，获得的X-MulV病毒悬液，其病毒滴度能够达到7.0log10PFU以上。采用pH 3.60,25℃,4h灭活重组融合TNF-a蛋白药物中指示病毒X-MulV，能够实现有效灭活，其病毒滴度降低大于4.0 log10PFU;此灭活条件下，TNF-α生物学活性良好;低pH影响包膜基因env 3'-末端1626-1930位点，X-MulV能够被有效灭活可能与该位点有关。