检测禽白血病病毒的荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

摘要

gag基因是禽白血病病毒(ALV)的群特异性基因,根据GenBank中公布的gag基因的保守序列,按照real-time PCR引物的要求设计合成了1对引物,建立了基于SYBR GreenⅠ模式的检测禽白血病病毒的实时荧光定量RT-PCR方法。该方法只对目的基因有扩增,对其它无关病毒核酸无特异性扩增；扩增效率为94.6％；组内的为0.28％～1.45％；组间CV％为2.3％-3.84％；最低可检测82个拷贝的病毒DNA,在8.2×102～8.2×107拷贝的范围内有很好的线性关系(r=0.9994)；可在5h内完成样品检测；与普通PCR方法相比,灵敏度高出103倍.对10例临床疑似样本的检出率为4/10,高于普通PCR的3/10.将4份阳性样本测序,结果证明为ALV的特异序列,与ALVgag基因核苷酸同源性为97.8～98.9％。对重庆14个县的14个健康商品蛋鸡群的134份粪便棉拭子进行检测,ALV的检出率为38.1％,带毒鸡群的阳性率为14/14.本方法的建立为禽白血病的快速诊断、大规模检疫、监测、流行病学调查以及药物筛选等提供了新的检测方法。