嗜酸乳杆菌16s rRNA PCR检测方法的建立

摘要

根据嗜酸乳杆菌16s rRNA保守区的基因序列,自行设计合成1对特异性扩增509bp目的片段的引物,上游引物为5′CAT AGC CGA GTT GAG AGA TG 3′,下游引物为5′ATC TAA TCC TGT TCG CTA CCC A 3′.通过对PCR扩增条件的优化,建立了检测嗜酸乳杆菌的PCR方法.植物乳杆菌、保加利亚乳杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌均为阴性;嗜酸乳杆菌参考株则可扩增出509bp的特异性条带.扩增产物序列分析表明扩增片段的序列与GENEBANK发表的参考菌的核苷酸序列符合率为99﹪.用建立的PCR方法对分离的嗜酸乳杆菌进行检测,同样获得与嗜酸乳杆菌参考株一致的目的条带.实验结果表明,建立的PCR方法能够特异的检测嗜酸乳杆菌.