猪瘟病毒非结构蛋白NS2基因不同片段的克隆及在原核系统中的高效表达

摘要

参照猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株(HCLV)的基因组序列,设计并合成一组引物.从已构建含有猪瘟病毒兔化弱毒株全基因组质粒pMCfT1-6中分别扩增出NS2长1389bp和876bp的片段.将扩增的不同长度的NS2基因序列克隆至表达载体pGEX-KG中,经酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),于37°C,1.0mmol/L IPTG条件下诱导表达.大肠杆菌菌体裂解产物经SDS-PAGE分析,在分子量约为40kDa处出现和预期的目的蛋白分子量相符的条带.Western-blotting检测表明,表达产物能与猪瘟病毒阳性血清发生特异性反应,出现单一反应带,该表达产物主要存在于包涵体中.上述结果为NS2基因表达产物在免疫检测中的进一步应用奠定了基础.