入侵相关蛋白的串联表达及利用PrimE-Boost法免疫保护作用的研究

摘要

为了探讨入侵相关蛋白的串联表达及新型免疫程序PrimE-Boost法对鸡体感染柔嫩艾美耳球虫的免疫保护作用.以本课题组所获得四种入侵相关蛋白分子为基础,生物信息学分析其关键功能结构域,利用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术连接功能结构域的表达基因,分别对串联基因进行原核、真核表达,应用新型免疫程序DNA抗原首次免疫及嵌合蛋白增强免疫法对鸡体进行免疫-3日龄首免DNA抗原,10日龄加强免疫嵌合抗原蛋白,20日龄感染柔嫩艾美耳球虫.分别于3d,10d,20d评价鸡体抗体及细胞因子IL-2,IL-12,IFN-γ水平,27d评价免疫保护率.结果:目前已成功克隆获得四种入侵相关蛋白分子功能结构域的表达基因,并重组拼接为嵌合抗原CA(约1200bp).成功构建真核表达重组质粒CA-pVAXⅠ,并获得肌肉细胞内表达,成功构建原核表达CA-Pcold-43重组质粒,获得纯化的重组蛋白.免疫保护作用研究正在同步进行.本研究为新型抗球虫疫苗及新型免疫程序的研究提供了理论基础和新思路.