巴斯德杆菌属CODEHOP PCR检测方法的建立与初步应用

摘要

目的：建立巴斯德杆菌的CODEHOP PCR快速检测方法,为实验动物的呼吸道细菌的控制提供参考. 方法：应用CODEHOP在线简并引物设计工具,比对Genbank中13株巴斯德杆菌的RNA聚合酶β亚基(rpoB)氨基酸序列设计简并引物.对建立CODEHOP PCR方法用21株参考菌株进行特异性和敏感性评价,并应用于实验动物中的巴斯德杆菌检测. 结果：简并引物PastF6/PastR5扩增标准菌株的目的片段为200bp左右.能够区分受试的巴斯德杆菌和主要的实验动物呼吸道病原菌.敏感性为0.2pg/μL～2pg/μL.在受试的609只实验动物中呼吸道样品中检测出巴斯德杆菌阳性率为19.1％.样品阳性片段经测序验证,准确率为100％. 结论：所建立的方法具有良好的特异性和敏感性,可用于动物样品中巴斯德杆菌的检测.