透性化细胞海藻糖合成酶的制备及其催化合成海藻糖的工艺优化

摘要

笔者以麦芽糖为底物,开展经渗透细胞技术处理得到的透性化细胞海藻糖合成酶催化制备海藻糖的新工艺开发.首先,对比不同透性化试剂对异源表达海藻糖合成酶的大肠杆菌工程菌的透性化处理效果,发现使用硫酸粘杆菌素时海藻糖合成酶的催化转化率高达64.6％,是传统超声破碎的2.63倍;其次,通过参数优化获得硫酸粘杆菌素透性化处理的最佳条件,即:1.5g/L的硫酸粘杆菌素在30℃下处理60min,得到的海藻糖合成酶活性最高,为5209U/mL;最后,利用透性化处理后的大肠杆菌工程菌进行全细胞催化制备海藻糖工艺研究,结果表明:以质量分数25％的麦芽糖为底物,在pH7.5、30℃条件下,获得海藻糖的转化率为65.6％;进一步通过离心收集细胞进行反复催化试验,在20批次之后,转化率仍维持在62.5％,显示了良好的应用前景.