鳕鱼皮胶原蛋白肽对小鼠肝损伤的保护机制研究

摘要

目的：探讨鳕鱼皮胶原蛋白肽(cod skin collagen peptide,CSCP)对小鼠慢性肝损伤的修复作用. 方法：通过胰蛋白酶酶解鳕鱼皮得到CSCP,其条件是酶解温度50℃,pH6,时间8h,加酶量2000U/g.将实验小鼠分为为正常组、模型组、阳性药物组、低剂量组CSCP：150mg/kg BW)、中剂量组(CSCP：200mg/kg BW)、高剂量组(CSCP：400mg/kg BW).小鼠实验周期为8w,3次/w腹腔注射25％的CC14花生油溶液,从第4w开始每天灌胃给予不同浓度的CSCP和阳性药物,观察小鼠的日常行为.末次灌胃给药后禁食不禁水，24h后取血、取肝脏，通过HE染色、电镜技术观察肝的形态学变化，检测反映肝功能的生化指标，免疫组织化学和Western blotting技术检测相关蛋白的表达情况。 结果：正常组小鼠精神状态好，有主动觅食、饮食的倾向;模型组小鼠有嗜睡现象，无主动觅食、饮食的倾向;阳性药物组和CSCP给药组小鼠较模型组的精神状态有所改善。正常组小鼠肝脏颜色暗红，阳性药物组和CSCP各用药组的小鼠肝脏颜色较浅;低剂量组小鼠的肝脏颜色深于高剂量组，而高剂量组小鼠的肝脏体积小于低剂量组。CSCP可以明显降低小鼠血清中AST、ALT、ALP、y -GT活性，明显升高肝组织匀浆中SOD, GSH-Px, CAT活性，显著降低MDA含量。HE染色观察，模型组小鼠肝小汗1不完整，肝索紊乱，大量炎症细胞浸润，脂肪变性;CSCP给药组小鼠肝小叶较为完整、肝索排列清晰，炎症细胞减少、脂肪变性减弱;透射电镜显示模型组小鼠肝细胞内出现线粒体肿胀明显、脂肪病变、炎症细胞浸润等症状，而给药组小鼠肝细胞受损情况得到改善，线粒体肿胀减弱、脂肪病变减轻、炎症细胞浸润减少。免疫组化结果显示TNF- a在模型组阳性表达明显，给药组TNF-α阳性表达减弱。Western blotting结果显示CSCP组JNK基因磷酸化程度减弱，TNF-α蛋白表达量降低，抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达量增加，促凋亡基因$ax和Caspase家族的Cleavage Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著降低，细胞色素C蛋白表达也明显降低。 结论：CSCP对小鼠慢性肝损伤具有明显的修复作用，可开发出安全、有效的慢性肝病保健食品。