结核分枝杆菌膜囊泡的分离及其功能初探

摘要

目的：分离体外培养的结核分枝杆菌分泌的膜囊泡,检测其形态和粒径分布,初步探索结核分枝杆菌膜囊泡对巨噬细胞中细胞因子释放的作用. 方法：7H9培养基复苏、扩大培养结核分枝杆菌实验室参考株H37Rv至对数期,菌体全部接种于苏通培养中继续培养3周,离心取上清,超滤浓缩结合超速离心分离提取结核分枝杆菌膜囊泡,透射电镜观察膜囊泡的大小、形态,纳米颗粒跟踪仪分析膜囊泡粒径及分布.同时,结核分枝杆菌膜囊泡按照100∶1(膜囊泡∶细胞)处理PMA(50ng/ml)诱导贴壁的THP-1细胞4h,更换新鲜培养基后0、4、8、24h收集细胞培养上清,Milliplex多细胞因子检测试剂盒检测细胞因子释放,反应结束后Luminex200读取数据. 结果：透射电镜显示H37Rv分泌的膜囊泡大小均一,圆形囊泡结构,直径约100nm,纳米颗粒跟踪仪显示膜囊泡粒径峰值为109nm,平均粒径128nm,主要分布在30～490nm之间,小于250nm的膜囊泡数量占总量的97.85％.与不感染组(NC)相比,H37Rv分泌的膜囊泡感染人THP-1源巨噬细胞后,培养上清中TNF-α、IL-6的水平随时间延长而增加. 结论：本研究建立了结核分枝杆菌膜囊泡分离提取的技术流程,可以得到纯度较好、形态完整、粒径正常的膜囊泡.同时,结核分枝杆菌膜囊泡可以诱发巨噬细胞中细胞因子TNF-α和IL-6的释放.