汉城型汉坦病毒山东株M与S片段的序列分析及核衣壳蛋白基因在真核细胞中的表达

摘要

目的:研究山东省SEO型汉坦病毒(Hantavirus,HV)最新的基因变异情况,探讨重组NP的抗原性.方法:从三份出血热病毒抗原阳性的鼠肺标本中RT-PCR扩增两个病毒株(ZB8和GM04-38株)的M片段和一个病毒株(JUN5-14株)的S片段.将PCR产物分别克隆测序.将获得的病毒序列与GenBank已有的SEO病毒序列进行同源性分析和系统发生树分析.并且将获得的S片段的NP基因在BHK21细胞中进行表达,间接免疫荧光法和免疫印记法观察NP的表达情况,并评价重组NP为抗原检测出血热病人血清中抗体的效果.结果:两株HVM片段与SEO病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别在84.4～97.5％,96.9～99.7％之间,JUN5-14株S片段与SEO病毒的核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5～97.8％,97.9～99.8％之间,系统发生分析显示三株山东SEO病毒株均为3亚型SEO型HV.NP在BHK21细胞中得到了高效表达,重组NP与病人血清具有良好的免疫反应性.结论:三株HV均为第3亚型SEO病毒,与非山东分离SEO病毒有一定的差异.重组JUN5-14株NP可以作为HV的血清学检测的良好的抗原.