一种用于大肠杆菌胞内极性物质分离分析的亲水作用液相色谱方法

摘要

首先通过对四根柱子(TSK-amide, Waters HILIC, Waters amide, Merck Zic-HILIC)的比较分析，发现Merk Zic-HILIC柱子相对于其他三种柱子更适用于磷酸糖及核普酸类物质的分离检测，可以得到较好的峰型，除糖类物质外对其他几类物质也有较好的分离能力，所以它被选作用于亲水作用液相色谱方法的开发。然后考察了流动相的盐浓度，pH对几类物质的标样及实际样品的分离分析影响，确定了最佳的液相色谱分离条件，同时考察了样品复溶溶剂对方法检测的影响。另外选取一些包括氨基酸，有机酸，核苷，磷酸糖，核苷酸类物质标样对该方法进行表征，发现该方法对大部分氨基酸和核苷类物质检测灵敏度均低于3ng/mL，部分磷酸糖和核苷酸检测灵敏度稍高些100ng/mL，线性范围为2-3个数量级。五个内标日内的精密度均小于5%，内标回收率除glutamine-d4的中浓度和高浓度外，其它在75%-125%之间。