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亲和毛细管电泳研究紫檀芪与牛凝血酶相互作用

摘要

本文以牛凝血酶(B-Thr)作为配体,紫檀芪作为受体,利用亲和毛细管电泳的方法研究二者间相互作用。以PTS为受体,甲醇作为中性标记物,将B-Thr作为配体按浓度梯度(0、0.5、1.0、2.0、5.0uM)加入硼砂硼酸缓冲液(12.Smmol.L-1硼砂-50 mmol.L-1硼酸pH8.7)中。随B-Thr浓度增加,PTS的峰明显降低,迁移时间由2.69min增加到7.19min,甲醇峰也随背景缓冲液中蛋白浓度改变发生明显改变。当B-Thr浓度大于2uM时,PTS峰展宽,峰面积降低,迁移时间减慢,说明PTS与缓冲液中的B-Thr配体存在相互作用。用淌度迁移法计算,通过淌度比差值与缓冲液中配体蛋白浓度关系,计算出PTS与牛凝血酶的结合常数Kb为3.91×105L/mol。

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