口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达及检测

摘要

利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒3AB基因在重组杆状病毒中的表达研究。首先克隆了3AB基因片段,将pMD18-3AB质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBac Ⅰ分别用EcoR Ⅰ及Xba Ⅰ酶切后,用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pFastBac-3AB；再将该重组质粒转化DH10 Bac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-3AB；将Bacmid-3AB转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒,并进行表达水平的检测。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,3AB蛋白在重组杆状病毒中获得表达。