禽流感免疫毒素HASeFv-PE40的构建及其生物学活性初步测定

摘要

目的：构建可特异杀伤H5N1亚型禽流感病毒感染细胞的重组免疫毒素，并在体外探讨其生物学活性。rn 方法：SOE法扩增合成HA单抗的单链抗体基因HA-ScFv，通过酶切、连接方法将HA-ScFv基因与绿脓杆菌外毒素PE40基因相连，装入质粒pET28a，构建重组免疫毒素HASeFv-PE40的原核表达载体，IPTG诱导表达的融合蛋白纯化后以MTT方法测定重组免疫毒素对病毒感染细胞的特异杀伤活性，以荧光定量PCR方法测定重组免疫毒素抑制病毒复制活性。rn 结果：扩增合成了HA单抗的单链抗体基因HA-ScFv，全长714bp，编码238个aa；构建了重组免疫毒素HAScFv-PE40的原核表达载体，通过IPTG诱导，表达蛋白大小为6.6KD，与推导分子量相符，Western-blot实验证明可与抗PE40的多抗特异结合；MTT实验结果表明重组毒素的最大无毒浓度为35μg/ml，最大细胞杀伤率为56.1％，荧光定量PCR结果表明重组免疫毒可有效抑制病毒复制，与病毒对照组相比，用药组病毒拷贝数最大可降低10倍以上。rn 结论：免疫毒素具有一定抑制流感病毒复制功能，具有开发应用前景。