利用Red重组系统对牛酪蛋白基因间不同长度的间隔序列及αs1-酪蛋白基因CDS区的敲除

摘要

借助Red重组系统通过空隙修复(Gap-repair)方式顺利从BAC克隆RP42-254I13获得包括αs1-，β-酪蛋白基因以及两个基因之间的19.6 kb序列在内的82 kb的DNA序列(pBAcLinksp-AD，在其它实验中已经成功获得此重组质粒，见图1)，本试验主要是以这个82 kb的重组质粒为基础，利用Red重组系统成功逐段敲除两个牛酪蛋白基因之间的不同长度(19 kb，14.5 kb，10 kb，5 kb)的间隔序列以及α s1-酪蛋白基因的CDS区。方法：设计引物，PCR扩增同源臂：酶切同源臂、PKS载体和Neo基因及连接;连接产物的鉴定;最后进行同源重组，通过抗性基因筛选阳性克隆。结果：获得了缺失不同大小片断的基因序列以及缺失CDS区的αs1-酪蛋白基因，为研究αs1-和β-酪蛋白基因3端侧翼序列(19.6 kb间隔序列)在牛酪蛋白基因座控制区的定位奠定坚实的技术基础，并为随后插入外源基因，研究其表达功能，进行乳腺生物反应器的研究提供了方法。