猪圆环病毒2型ORF2/猪白介素2嵌合基因真核表达载体的构建、表达及在小鼠体内的免疫效果研究

摘要

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)核酸疫苗，本研究采用重叠延伸PCR(Splicing by overlap extension-PCR，SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PCV2的ORF2全长基因和猪白介素2成熟肽基因(PoIL-2)构建成PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中；筛选阳性重组表达质粒(rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2)转染COS-7细胞，分别采用PCV2抗原间接免疫荧光试验和PoIL-2蛋白ELISA试验方法检测COS-7细胞中表达的重组融合蛋白(rCap-linker-PoIL-2)生物学活性；提取rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2和只含PCV2ORF2基因的重组表达质粒pcDNA3.1/OFR2(rpcDNA3.1/OFR2)免疫BALB/c小鼠并检测其免疫效果。结果表明：成功构建了PCV2-linker-PoIL-2嵌合基因及其pcDNA3.1(+)重组表达质粒；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2在COS-7细胞浆内进行了表达，表达的rCap-linker-PoIL-2可分别与抗PCV2和抗PoIL-2蛋白抗血清发生特异性免疫反应，表明rCap-linker-PoIL-2蛋白具有Cap蛋白和PoIL-2蛋白的双重生物学活性；rpcDNA3.1/PCV2-linker-PoIL-2质粒免疫小鼠后可诱导小鼠产生明显的抗PCV2抗体，且其诱导的抗体水平明显高于rpcDNA3.1/OFR2。