表达猪瘟病毒E2蛋白的重组腺病毒的构建及其在兔体内的免疫原性分析

摘要

本研究旨在构建猪瘟重组腺病毒载体疫苗。通过细菌内同源重组法构建了含有猪瘟病毒E2基因的重组腺病毒rAdV-E2，测定其一步生长曲线，同时用间接免疫荧光试验和Western blot检测外源基因表达，然后用rAdV-E2免疫家兔，免疫后6周用兔化弱毒疫苗进行攻击，攻毒后3d取其脾脏，用荧光定量RT-PCR检测兔化弱毒RNA。结果表明，该重组腺病毒传至第10代时，毒价可达1.0×1010TCID50/mL；外源基因可在其中得到稳定表达；rAdV-E2接种兔免疫后2周产生猪瘟特异性抗体，免疫后5周抗体达到峰值，攻毒后rAdV-E2免疫兔均未出现定型热反应，从其脾脏也未检测到猪瘟兔化弱毒RNA，而野生型腺病毒免疫家兔均出现了定型热反应，并且从其脾脏检测出大量病毒RNA，其含量达到了103拷贝/μL以上。这表明rAdV-E2可望发展成为猪瘟疫苗的候选疫苗。