猪肺炎支原体P97C末端基因重组腺病毒的构建与鉴定

摘要

从猪肺炎支原体基因组中扩增其黏附因子P97C末端基因，然后通过KpnⅠ和SalⅠ酶切位点把该基因克隆入经过同样双酶切的穿梭载体pShuttle-CMV中。将鉴定正确的的重组穿梭质粒经PmeⅠ线性化后电转化入内含腺病毒骨架载体的BJ5183感受态细胞中，通过细菌内同源重组获得重组腺病毒DNA。纯化后的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切线性化后转染AD293细胞获得重组腺病毒。重组腺病毒经间接免疫荧光和WesternBlot鉴定，证明了该重组腺病毒成功的表达了P97C末端蛋白。将该重组病毒进行纯化并进行滴度测定，获得了高纯度、高滴度的表达P97C末端基因的重组腺病毒，为研制新型猪肺炎支原体疫苗奠定了基础。