BmK ANEPⅢ植物表达载体构建及根癌农杆菌转化条件考察

摘要

目的 构建东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch)抗神经兴奋肽Ⅲ（anti-neuroexcitation peptide，ANEPⅢ)植物表达载体，并转化获得根癌农杆菌工程菌。方法 以植物表达载体pBin438为母核，利用分子克隆技术构建含有启动子CaMV DE35S、O’翻译增强子、3’端含有内质网滞留肽SEKDEL编码区的ANEPⅢ目的基因和NOS终止子表达盒，得重组质粒pBI121- DE35S-ANEPⅢ。应用液氮冻融法、三亲杂交法、电击法转化根癌农杆菌EHA105，考察关键因素对转化效率的影响。结果 成功构建ANEPⅢ植物双元表达载体pBin-ANEPⅢ 和 pBI121-DE35S-ANEPⅢ，并获得用于遗传转化的工程菌pBI121-DE35S-ANEPⅢ/ EHA105。结论 本实验在植物表达载体中加入几种调控元件，为实现提高转基因植物表达外源蛋白量增 加可能性。