一种基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型

摘要

目的：构建基于荧光素酶的单次感染HIV药物筛选细胞模型用于抗HIV药物筛选。rn 方法:构建含荧光素酶报告基因luc的假型慢病毒质粒，将VSV—G外膜糖蛋白的表达质粒，HIV-1 Rev蛋白表达质粒，HIV Gag—pol蛋白表达质粒和含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒共转染293FT细胞，制备假型慢病毒。在假型慢病毒生产和再感染新鲜293FT细胞的过程中加入逆转录酶和蛋白酶抑制剂(如AZT，Zidovudine)，检测再感染新鲜293FT细胞中荧光素酶的表达水平，从而判断药物对HIV的抑制作用，进行模型的建立及条件的优化。rn 结果：成功地构建了含荧光素酶报告基因的重组慢病毒质粒pLenti—Luc。利用已知的抗HIV药物进行测试，发现HIV药物处理组细胞中荧光素酶活性低于对照组。rn 结论：成功地建立了基于荧光素酶的HIV药物筛选细胞模型，该系统使用单次感染的报告病毒，具有良好的安全性，而荧光素酶报告基因使该系统具备极高的敏感性。