mTOR介导小豆蔻明抑制糖酵解诱导SKOV3细胞自噬的研究

摘要

目的：探讨小豆蔻明(Cardamonin,CAR)诱导卵巢癌细胞自噬的作用,并阐明其与糖酵解间的相关性.rn 方法：卵巢癌SKOV3细胞株分别设立对照组、CAR组(5,10,20μM)、Rapamycin(RAP)组(0.1μM)、2-deoxy-D-glucose(2-DG)组(10mM),Compound C(10μM)组,Compound C+CAR组(10μM+20μM).采用比色法测定乳酸含量、ATP含量、葡萄糖含量、HK活性及LDH活性.Western Blot法检测P-mTOR、mTOR、P-S6K1、S6K1、P-AMPK、AMPK、HK2、LC3、LAMP1蛋白表达,MDC染色法检测细胞自噬水平.rn 结果：CAR、RAP、2-DG处理卵巢癌SKOV3细胞24、36、48、60、72h后,乳酸的分泌下降显著.48h CAR对乳酸分泌的抑制作用最大,且作用趋于稳定;CAR、RAP、2-DG处理卵巢癌SKOV3细胞48h后,细胞内ATP含量降低,细胞外葡萄糖增加,且两者都呈浓度依赖性;同时CAR、RAP降低HK2活性及LDH活性,其中LDH活性降低与CAR组浓度呈正相关,2-DG对两种酶的活性无影响;CAR、RAP、2-DG均能增加LC3、LAMP1蛋白表达以及自噬体MDC染色荧光强度;同时降低mTOR、S6K1的磷酸化以及HK2的蛋白表达,而增加P-AMPK表达;Compound C、CAR、Compound C+CAR分别干预卵巢癌SKOV3细胞48h后,各给药组对AMPK蛋白表达无影响.Compound C显著下调CAR引起的P-AMPK及LC3蛋白的表达.rn 结论：CAR所诱导的卵巢癌SKOV3细胞自噬与下调mTORC1活性引起的糖酵解抑制有关.