脑膜炎球菌表面蛋白fHBP的亚家族特异性及其免疫原性

摘要

目的:原核表达脑膜炎球菌表面蛋白fHBP,研究其免疫原性.rn 方法:筛选A和B两个亚家族的fHBP基因序列分别克隆至质粒pET-24b(+)和pET-28a(+),构建重组表达质粒pET-28a-/HBP-A和pET-24b fHBP-B.转化感受态细胞E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备多克隆抗体.采用流式细胞术、血清杀菌力试验和被动免疫保护试验评估抗原的免疫原性.rn 结果:两个蛋白的重组表达质粒成功构建.fHBP-A以包涵体形式表达,fHBP-B以可溶形式表达,纯化后纯度均高于95％.重组蛋白免疫家兔制备抗血清,经流式细胞术检测可与靶菌发生特异性结合反应,血清杀菌力试验检测到明显的杀菌反应,被动免疫保护试验证明在NIH乳鼠体内抗血清能有效清除靶菌.各项试验均呈现显著的亚家族特异性.rn 结论:fHBP蛋白具有良好的免疫原性,可作为B群流脑疫苗的候选抗原.