猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

摘要

目的：本研究利用巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)纤突糖蛋白S。方法：根据GenBank猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白S全基因设计一对引物，并在5'弓I物和3'引物中引入EcoR I、Not I酶切位点，2.2 kb的目的基因S经PCR扩增后克隆于pBS-T载体，再将S基因经双酶切从T载体切下并与穿梭质粒pPIC9k连接，Sal I线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S，电转化线性化重组穿梭质粒pPIC9k-S于GS115感受态细胞，G418 筛选鉴定阳性重组子，经甲醇诱导，SDS-PAGE检测诱导后上清。结果：对pPIC9k-S重组酵母表达载体的测序证实已成功克隆了TGEVS基因; 重组酵母菌诱导表达后，SDS-PAGE电泳检测结果显示表达产物的分子量约为82KD，且S蛋白以可溶性形式分泌表达于胞外。结论：利用巴斯德毕赤酵母真核表达系统成功表达了猪传染性胃肠炎病毒(河北分离株)纤突糖蛋白S。