猪附红细胞体病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用

摘要

本研究以纯化的猪附红细胞体特异性抗原作为包被抗原，在建立猪附红细胞体病间接ELISA检测方法的基础上进行了各反应参数的优化，确定了各参数的最适反应条件，并初步组装成试剂盒。组装的试剂盒抗原最佳包被浓度为30μg/mL，被检血清稀释度为1：100，酶标二抗的最适工作浓度为1：4 000，底物TMB最适反应条件为室温15min。检测血清的判定标准为OD450nm值≥0.13定为阳性反应，OD450nm值≤0.11定为阴性反应，0.11-0.13之间定为疑似反应。该试剂盒不与猪大肠杆菌、猪弓形虫、猪瘟等阳性血清发生交叉反应，具有较好的特异性;在不同时间对阴阳性样品重复测8次，阴阳性血清的OD450nm值变异系数均未超过10％，说明该试剂盒具有良好的重复性。通过对组装试剂盒中各组分的稳定性和保存时间的测定结果证实，该试剂盒的保质期暂定为6个月。应用保存6个月的试剂盒通过对延边地区的60份猪血清样本检测，并与间接ELISA比较，其阳性符合率达100％，说明该试剂盒具有较好的稳定性。本研究为猪附红细胞体病的快速诊断提供了一种新的有效途径，为试剂盒的进一步商品化奠定了基础。