从急性脑缺血再灌动态损伤过程及中药干预作用探讨毒损脑络的生物学基础

摘要

目的：急性脑缺血再灌后炎性因子、血管活性物质、细胞凋亡的动态变化和心脑舒通胶囊的干预作用，以探讨毒损脑络的生物学基础。rn 方法：实验一采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌模型。随机分为：假手术组，脑缺血1.5h后再灌3h、6h、12h、24h、48h、72h各组，共7组。HE染色和尼氏染色观察脑组织形态学变化和损伤状况;TUNBL法测定脑缺血损伤区神经细胞凋亡的变化。实验二采用线栓法阻塞大脑中动脉致大鼠局灶性脑缺血再灌模型。随机分为3组：假手术组，脑缺血1.5h后再灌24h模型组，心脑舒通胶囊治疗组。HE染色和尼氏染色观察大脑皮层区神经元形态学变化;透射电镜观察神经细胞超微结构改变;TUNEL法测定皮层区神经细胞凋亡的表达;生化法检测患侧大脑组织中MDA、SOD、LD和LDH的活力和含量;ELISA法测定患侧脑组织IL-1β与TNF-α的含量;放射免疫法检测6-keto-PGF1α、TXB2含量;RT-PCR法和免疫组化法检测VEGF、VEGFR2的基因和蛋白表达;免疫组织化学法测定大脑皮层中Bax、Bcl-2与Caspase-3蛋白的表达;RT-PCR法测定大脑皮层内Caspase-3基因的表达。rn 结果：实验一脑缺血1.5h再灌不同时间，大鼠脑组织内出现不同程度的病理损伤。HE染色和尼氏染色发现神经元细胞间隙增宽，水肿明显，有核固缩等现象。脑组织病理损伤趋势在再灌12h～48h内最为显著。皮层6-keto-PGF1α和TXB2含量在再灌24h时凋亡达最高峰。6-keto-PGF1α/TXB2比值呈下降趋势，于24h为最低。VEGF、VEGF2基因表达均呈现上升趋势，于24h升至高峰;VEGF蛋白表达亦呈上升趋势，于24h达到高峰。TUNEL结果发现神经细胞凋亡以再灌12h～48h时较明显，再灌24h时凋亡达最高峰。实验二心脑舒通胶囊可明显改善神经元水肿等现象。升高缺血侧脑组织中SOD活力，降低MDA、LD含量和LDH活力;减少TNF-α和IL-1β含量，降低6-keto-PGF1α和TXB2水平，降低皮层VEGF蛋白和VEGF2基因表达;降低皮层Bax和Caspase-3蛋白表达，增加Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax比值;显著减少凋亡的神经细胞数量。rn 结论：急性脑缺血后再灌不同时间可以诱发不同程度的脑组织损伤，炎性因子过表达，血管活性物质失衡和细胞凋亡，损伤的严重程度多集中于再灌24h。rn 提示：急性脑缺血再灌病理过程中存在动态变化的脑络损伤机制，表现为从毒生脑络损、脑络损生内毒，正邪交争、胜负消长。心脑舒通胶囊可以有效降低氧自由基损伤、炎性因子表达，维持血管活性物质比例，调节各种凋亡调控因子的表达，明显减轻急性脑缺血病理损害。不仅证明了氧自由基、炎性因子等毒性效应的存在。又因毒邪损害具有败坏形质和不可逆转特性，所以治疗上难以完全逆转急性缺血损害的病理过程;反证出毒损脑络是急性脑缺血损害关键病理环节。