三甲基氯化锡神经毒作用模式初探--NF-κB信号通路在三甲基氯化锡诱导的细胞凋亡中的作用

摘要

目的:在体外条件下，研究三甲基氯化锡(TMT)对细胞增殖、细胞凋亡以及细胞氧化损伤的作用，并探讨TMT对核转录因子(NF-κB)的作用。方法:(1)以不同浓度TMT(0、0．3125、0．625、1．25、2．5、5、10、20μmol/L)处理PC12细胞24、48h后，MTT法测定细胞增殖情况：(2)流式细胞术检测TMT作用12、24h后细胞凋亡率;(3)不同剂量TMT刺激6h后测定ROS和GSH水平的变化；(4)Western Blot检测核蛋白NF-κB的水平。结果:(1)MTT法显示：1．25、2．5、5、10、20μmol／L TMT 作用PC12细胞24、48h后对细胞增殖具有明显抑制作用，与溶剂对照组相比差异具有统计学意义，细胞存活率与TMT剂量、作用时间呈依赖性；(2)流式细胞术分析显示TMT能明显诱导PCI2细胞凋亡：1．25、2．5、5、10 μmol／Ｌ　TMT　作用细胞12h后，凋亡率分别为15．30％、18．90％、22．00％、36．50％，作用24h后，凋亡率分别为28．60％、43．54％、65．73％、74．67％，与对照组相比差异具有统计学意义；(3)1．25、2．5、5、10 μmol／L TMT作用细胞6h后，各剂量组ROS荧光强度分别是对照组荧光强度1．42、1．71、1．78、1．89倍,各剂量组荧光强度的增加与对照组相比具有统计学意义，GSH含量分别为0．28、0．17、0．19、0．07μmol/μg蛋白，与对照组相比GSH含量均下降，且差异具有统计学意义；(4)1．25、2．5、5、10 μmol／L TMT作用细胞12h后WB检测核蛋白NF-κB显示：随着剂量增加，核蛋白NF-κB条带明显增粗，各剂量组蛋白条带灰度值与内参蛋白灰度值比值分别为1．49、2．67、3．89、4．26，与对照组相比差异具有统计学意义。结论:在本实验室条件下，‘TMT对PCI2细胞具有明显抑制增殖和诱导凋亡的作用；其作用可能与氧化应激以及NF-κB信号通路的激活有关。