乙型脑炎病毒(SA-14-14-2株和P3株)单克隆抗体的研制及应用

摘要

目的：制备乙型脑炎病毒SA14-14-2(简称SA)和P3株的单克隆抗体，用于乙脑单克隆抗体捕获法检测血清乙脑病毒抗体，竞争抑制法及双抗体夹心法检测乙脑病毒的抗原含量。方法：分别用SA株减毒活疫苗和P3抗原免疫BALB／c小鼠，交叉加强1次，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0分别进行3次融合，培养上清经过分别包被人白蛋白(HSA)、P3、SA抗原的间接ELISA检测，选择HA抗体阴性、乙脑抗体阳性的克隆进行2次亚克隆，获得稳定的杂交瘤细胞，并对单抗进行鉴定。尝试用SA单抗建立捕获法检测血清乙脑病毒抗体，竞争抑制法和双抗体夹心法检测乙脑病毒抗原含量。结果：获得4株HSA-P3-SA+、3株HA-P3+SA-的杂交瘤细胞，7株单抗均为IgG1型，特异性好，但均无中和活性。SA单抗的相对亲合力3D1>5E3>6H3>4F12，均识别SA相同的抗原表位;P3单抗的相对亲合力1C7>5H12>3C4，均识别P3相同的抗原表位。用SA单抗5E3建立了抗体的捕获法、抗原的竞争抑制法及双抗体夹心法。结论:捕获法ELISA检测乙脑抗体比间接法更简便、敏感度更高，对于抗原浓度高的样品，双抗体夹心法检测比竞争抑制法更有优势。