DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途及化妆品

摘要

本申请涉及一种小分子化合物DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途及化妆品，所述化妆品添加剂或化妆品用于防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应。本申请公开的化妆品一方面能够显著降低细胞凋亡水平，以及减少中性粒细胞向炎症部位的募集迁移行为；另一方面可以提高人表皮细胞的抗氧化能力及增殖活性，从而说明DSF具有良好的抗炎抗氧化活性，具有用于抗炎抗氧化效果化妆品开发的应用前景。并且，与其他化妆品添加剂相比，DSF在极低剂量下便可发挥其抗炎抗氧化活性，该剂量下不会对生物体造成二次损伤，还可以低成本生产。

说明书

技术领域

本发明涉及DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途及化妆品，属于化妆品领域。

背景技术

皮肤作为覆盖人体表面的最大器官，是人类体表的天然屏障。敏感性皮肤被定义为由于各种因素，如物理(紫外线、热、冷和风)、化学(化妆品、肥皂、污染)、压力或荷尔蒙导致皮肤出现红斑，以及感受到灼热感，刺痛感和瘙痒。在化妆品和洗护用品大量使用的现代社会，敏感性皮肤是一种普遍现象。

面部皮肤在日常生活中表现出独特的功能特性，也是敏感皮肤的常见部位。面部皮炎常见的形式包括在太阳紫外线(UV)长时间照射下产生的炎症和晒伤等不良影响以及接触化妆品引起的过敏性接触性皮炎。皮肤在紫外线照射以及接触过敏源和细菌感染时会造成皮肤损伤，细胞产生氧化应激，并导致大量免疫细胞浸润，例如存活在皮肤中的中性粒细胞和巨噬细胞，引起皮肤炎症。如何在综合方面考虑抗炎，抗氧化作用，并且适合敏感肌肤，不会对皮肤产生刺激，造成皮肤的二次损伤成为我们寻找合适的化妆品添加剂所需解决的关键问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途及化妆品，其能够舒缓太阳紫外线照射以及皮肤化学品接触等引起的皮肤不良炎症反应，同时能防止和/或抑制氧化应激反应，起到抗氧化作用。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

第一方面，本申请提供了DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途，所述化妆品添加剂或化妆品用于防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应。

作为其中一个实施例，所述DSF为所述化妆品添加剂或化妆品的主要有效成分，所述DSF来源于野油菜黄胞单菌，并通过乙酸乙酯从过夜培养物上清液中提取获得，结构式为顺式11-甲基-2-十二碳烯酸：

作为其中一个实施例，所述化妆品添加剂或化妆品用于动物的皮肤和/或粘膜上。

作为其中一个实施例，所述DSF可减少炎症部位细胞凋亡的发生以及氧化应激反应。

作为其中一个实施例，所述DSF可抑制炎症部位处中性粒细胞的聚集积累。

第二方面，本申请提供一种化妆品，其包括作为化妆品原料的DSF，所述DSF为主要有效成分，所述DSF为顺式11-甲基-2-十二碳烯酸：

作为其中一个实施例，所述DSF在所述化妆品原料中的质量分数为0.02-0.06％。

作为其中一个实施例，所述化妆品还包括哺乳动物的皮肤和/或粘膜可接受的赋形剂和稀释剂，为本领域技术人员所知悉，且可以包括、但不限于水；植物油；矿物油；酯类，例如棕榈酸辛酯、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚类，例如二辛基醚和二甲基异山梨醇酯；醇类，例如乙醇和异丙醇；脂肪醇类，例如鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、十八烷醇和联苯醇；异链烷烃，例如异辛烷、异十二烷和异十六烷；硅油类，例如环甲硅油、二甲硅油、二甲硅油交联聚合物、聚硅氧烷及其衍生物，优选有机修饰的衍生物；烃油，例如矿物油、凡士林油、异二十烷和聚异丁烯；多元醇类，例如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；蜡，例如蜂蜡和植物蜡；或上述物质的任意组合或混合物。

进一步地，赋形还可以包含乳剂。适合的乳剂的非限制性实例包括油包水型乳剂、水包油型乳剂、水包硅氧烷型乳剂、硅氧烷包水型乳剂、水包蜡型乳剂、水-油-水三重乳剂等，它们具有霜剂、凝胶或微乳的外观。乳剂可以包括乳化剂，例如非离子型或阴离子型或两性表面活性剂。

作为其中一个实施例，所述化妆品可以被配制成各种产品形式，例如洗剂、霜剂、浆液、喷雾剂、气雾剂、粉饼、软膏剂、精油、凝胶、糊剂、贴剂、色笔、小毛巾、面膜、棒状物、泡沫、酏剂、浓缩物等，以适用于局部施用。进一步地，配制成洗剂、霜剂、软膏剂或凝胶。

作为其中一个实施例，所述化妆品选自化妆水、乳液、精华液、面霜或粉底中的一种或多种。

作为其中一个实施例，化妆品中还可以添加表面活性剂、透皮吸收促进剂、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、香精、香料等辅料。

第三方面，本申请提供一种非治疗性的处理人皮肤的方法，用于防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应，所述方法包括将有效量的所述的化妆品施用于人皮肤的步骤。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

本申请提供一种DSF作为化妆品添加剂或化妆品的用途，其能够显著降低细胞凋亡水平，以及减少中性粒细胞向炎症部位的募集迁移行为，说明DSF具有良好的抗炎活性，具有用于抗炎效果化妆品开发的应用前景。同时，DSF能够减少皮肤细胞的氧化应激反应，恢复其增殖活性，从而保护皮肤细胞起到抗氧化的功效。并且，与其他化妆品添加剂或化妆品相比，DSF在极低剂量下便可发挥其抗炎活性，该剂量下不会对生物体造成二次损伤，还可以低成本生产。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例并配合附图详细说明如后。

附图说明

图1为本申请一实施例所示的三组斑马鱼胚胎的苏丹黑B染色和中性粒细胞定量分析图；

图2为本申请一实施例所示的三组斑马鱼胚胎的吖啶橙染色和凋亡细胞定量分析图；

图3为本申请一实施例所示的三组人类永生化表皮细胞活性检测；

图4为本申请一实施例所示的三组人类永生化表皮细胞过氧化氢酶活力检测。

具体实施方式

下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。实施本发明的过程、条件、试剂、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制的内容。

所谓“统计学显著”指改变大于单独偶然发生可预期(可以是“假阳性”)。统计学显著能用本领域已知的任何方法测定。常用的显著性量度包括p值，其表示至少极限值在给定数据点获得结果的概率，假定该数据点是单独偶然结果。p值是0.05或更小时，通常认为结果显著性高。

第一方面，本申请提供了DSF作为化妆品添加剂或化妆品的非治疗性的用途，所述化妆品添加剂或化妆品用于防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应。

可选的，所述DSF为所述化妆品添加剂或化妆品的主要有效成分，所述DSF为顺式11-甲基-2-十二碳烯酸：

可选的，所述化妆品添加剂或化妆品用于动物的皮肤和/或粘膜上。

可选的，所述DSF来源于野油菜黄胞单菌，并通过乙酸乙酯从过夜培养物上清液中提取获得。

DSF可调控细菌生物膜的形成以及降低致病菌毒力基因的表达，能够有效抑制病原菌的定殖。在实验过程中，发明人发现DSF能够显著抑制致炎剂诱导斑马鱼皮肤炎症所导致的中性粒细胞向炎症部位募集和迁移行为，以及恢复UVB照射后导致的人皮肤细胞的增殖活力和过氧化氢酶活力下降，从而缓解炎症损伤并防止和/或抑制氧化应激反应，起到抗炎抗氧化效果。由此，提出DSF可作为化妆品添加剂发挥抗炎抗氧化的功效。

此外，发明人还发现，经DSF处理的斑马鱼皮肤炎症模型细胞凋亡水平有明显恢复至正常水平的趋势，因此本发明还提出DSF具有抗细胞凋亡的作用，可发挥修复炎症损伤的功效。

可选的，所述DSF可减少炎症部位细胞凋亡的发生以及氧化应激反应。

可选的，所述DSF可抑制炎症部位处中性粒细胞的聚集积累。

第二方面，本申请提供一种化妆品，其包括作为化妆品原料的DSF，所述DSF为主要有效成分，所述DSF为顺式11-甲基-2-十二碳烯酸：

可选的，所述DSF在所述化妆品原料中的质量分数为0.02-0.06％，在该剂量下，发明人发现其可发挥其抗炎活性，且不会对生物体造成二次损伤。

可选的，所述化妆品还包括动物的皮肤和/或粘膜可接受的赋形剂和稀释剂，为本领域技术人员所知悉，且可以包括、但不限于水；植物油；矿物油；酯类，例如棕榈酸辛酯、肉豆蔻酸异丙酯和棕榈酸异丙酯；醚类，例如二辛基醚和二甲基异山梨醇酯；醇类，例如乙醇和异丙醇；脂肪醇类，例如鲸蜡醇、鲸蜡硬脂醇、十八烷醇和联苯醇；异链烷烃，例如异辛烷、异十二烷和异十六烷；硅油类，例如环甲硅油、二甲硅油、二甲硅油交联聚合物、聚硅氧烷及其衍生物，优选有机修饰的衍生物；烃油，例如矿物油、凡士林油、异二十烷和聚异丁烯；多元醇类，例如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；蜡，例如蜂蜡和植物蜡；或上述物质的任意组合或混合物。

可选的，赋形剂还可以包含乳剂。适合的乳剂的非限制性实例包括油包水型乳剂、水包油型乳剂、水包硅氧烷型乳剂、硅氧烷包水型乳剂、水包蜡型乳剂、水-油-水三重乳剂等，它们具有霜剂、凝胶或微乳的外观。乳剂可以包括乳化剂，例如非离子型或阴离子型或两性表面活性剂。

可选的，所述化妆品可以被配制成各种产品形式，例如洗剂、霜剂、浆液、喷雾剂、气雾剂、粉饼、软膏剂、精油、凝胶、糊剂、贴剂、色笔、小毛巾、面膜、棒状物、泡沫、酏剂、浓缩物等，以适用于局部施用。进一步地，配制成洗剂、霜剂、软膏剂或凝胶。

可选的，所述化妆品选自化妆水、乳液、精华液、面霜或粉底中的一种或多种。

可选的，化妆品中还可以添加表面活性剂、透皮吸收促进剂、防腐剂、抗氧剂、保湿剂、香精、香料等辅料。

第三方面，本申请提供一种非治疗性的处理人皮肤的方法，用于防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应，所述方法包括将有效量的所述的化妆品施用于人皮肤的步骤。通过将化妆品涂抹或局部涂抹在人皮肤上，可以在起到正常化妆效果的同时，防止和/或抑制氧化应激反应，和/或炎症反应。

下面将结合具体实施例进行进一步说明。

实施例一检测DSF对致炎剂诱导斑马鱼胚胎中性粒细胞聚集积累的抑制作用

1、鱼卵收集

前一天晚上选取健康的成年斑马鱼，公鱼和母鱼按1：1的比例放入交配盒中，中间插有挡板，隔天早上拔出挡板。将胚胎收集在培养皿中，加入胚胎培养基，在28.5℃的恒温培养箱中培养。

2、皮肤炎症模型构建以及DSF处理

将斑马鱼胚胎分成三组，分别是对照组，模型组和实验组。对照组仅使用正常培养基处理，模型组中加入适量的致炎剂，实验组加入致炎剂的同时加入DSF共处理。待各组斑马鱼处理至3dpf，收集斑马鱼胚胎准备进行中性粒细胞的检测。

3、斑马鱼胚胎中性粒细胞的检测

将收集的各组斑马鱼胚胎用新鲜的胚胎培养液洗三遍，加入4％多聚甲醛固定过夜。用PBST冲洗胚胎后，加入苏丹黑B染色液染色30min，再用70％乙醇冲洗，冲洗期间每隔15min，用显微镜观察一次，直至染色清晰可见。然后用PBST将乙醇洗去，苏丹黑B可对中性粒细胞中的颗粒着色，在显微镜下可观察到的斑马鱼皮肤上的黑色点状聚集为着色的中性粒细胞，记录细胞的迁移募集行为和聚集数量。

实验结果：

如图1所示，与对照组相比，模型组斑马鱼胚胎在加入致炎剂后，皮肤上的中性粒细胞出现明显的增多和聚集行为(#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001)，与模型组相比，在加入DSF后，斑马鱼皮肤上积累的中性粒细胞数量出现明显的减少，差异有统计学意义(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。说明DSF能够抑制炎症引起的中性粒细胞聚集，具有抗炎活性。

实施例二检测DSF对致炎剂诱导斑马鱼胚胎细胞凋亡的抑制作用

1、鱼卵收集

前一天晚上选取健康的成年斑马鱼，公鱼和母鱼按1：1的比例放入交配盒中，中间插有挡板，隔天早上拔出挡板。将胚胎收集在培养皿中，加入胚胎培养基，在28.5℃的恒温培养箱中培养。

2、皮肤炎症模型构建以及DSF处理

将斑马鱼胚胎分成三组，分别是对照组，模型组和实验组。对照组仅使用正常培养基处理，模型组中加入适量的致炎剂，实验组加入致炎剂的同时加入DSF共处理。待各组斑马鱼处理至4dpf，收集斑马鱼胚胎准备进行细胞凋亡的检测。

3、斑马鱼胚胎细胞凋亡的检测

将收集的各组斑马鱼胚胎用新鲜的胚胎培养基洗两遍后进行吖啶橙染色以检测4dpf的斑马鱼胚胎中的凋亡细胞。斑马鱼胚胎在室温下10μg/mL的吖啶橙染色溶液中避光孵育30分钟。用新鲜的胚胎培养基冲洗3遍后，在荧光显微镜下观察细胞凋亡数量。

实验结果：

如图2所示，模型组斑马鱼胚胎在诱导炎症反应后，相比对照组的荧光染色颗粒数量出现明显的增加(#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001)，说明细胞出现大量凋亡，与模型组相比，在加入DSF后，斑马鱼凋亡细胞数量明显降低，差异有统计学意义(*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。说明DSF能够减少炎症引起的细胞凋亡，具有抗炎活性。

实施例三检测DSF对紫外照射后的人类永生化表皮细胞活性影响

1、细胞培养

将HaCaT细胞用含10％小牛血清、1％青霉素和1％链霉素的DMEM培养基于37℃、5％CO2、相对饱和湿度条件培养，2～3d传代，取对数生长期细胞进行试验。

2、取对数生长期HaCaT细胞，调整细胞密度为5×10

3、DSF实验组在UVB照射诱导细胞氧化损伤后，加入DSF处理。

4、MTT法测定细胞增殖活性

弃培养液，PBS洗涤，每孔加入100μL浓度为0.5mg/L的MTT溶液，孵育4h，小心吸弃孔内液体，每孔加150μLDMSO，振荡10min，在酶标仪490nm波长下测定各孔光吸收值，根据公式计算细胞增殖活性。细胞增殖活性＝氧化损伤组或DSF实验组/正常对照组×100％。

请参见图3，结果表明，DSF实验组中细胞的增殖活性对比氧化损伤组有明显的恢复至正常水平的趋势(#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。

实施例四检测DSF对紫外照射后的人类永生化表皮细胞中的过氧化氢酶活力影响

1、细胞培养

将HaCaT细胞用含10％小牛血清、1％青霉素和1％链霉素的DMEM培养基于37℃、5％CO2、相对饱和湿度条件培养，2～3d传代，取对数生长期细胞进行试验。

2、取对数生长期HaCaT细胞，调整细胞密度为5×10

3、DSF实验组在UVB照射诱导细胞氧化损伤后，加入DSF处理。

4、试剂盒测定过氧化氢酶的活力

取各组细胞，离心弃上清，PBS洗涤后稀释成1×10

请参见图4，结果表明，与正常对照组相比，氧化损伤组细胞的过氧化氢酶活力显著下降；与氧化损伤组相比，DSF实验组细胞的过氧化氢酶活力显著升高。说明其对氧化损伤抗性有所提升(#p＜0.05，##p＜0.01，###p＜0.001，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。

综上所述：

本申请提供一种DSF作为化妆品添加剂或化妆品的用途，其能够显著降低细胞凋亡水平，以及减少中性粒细胞向炎症部位的募集迁移行为，说明DSF具有良好的抗炎活性，具有用于抗炎效果化妆品开发的应用前景。同时，DSF能够减少皮肤细胞的氧化应激反应，恢复其增殖活性，从而保护皮肤细胞起到抗氧化的功效。并且，与其他化妆品添加剂或化妆品相比，DSF在极低剂量下便可发挥其抗炎活性，该剂量下不会对生物体造成二次损伤，并且可以低成本生产。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。