一种注射液中有关物质长春胺酸与阿朴长春胺酸的检测方法

摘要

本发明提供一种注射液中有关物质长春胺酸与阿朴长春胺酸的检测方法，采用高效液相色谱法对长春西汀注射液中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸进行定量鉴别，色谱条件为：色谱柱的填充剂为氰基硅烷键合硅胶，流速为0.5‑0.7mL·min‑1，柱温为30～34℃，以体积比为30～65∶65～70的0.1mol/L～0.25mol/L三乙胺溶液和乙醇为流动相。本发明利用高效液相色谱法测定长春西汀注射液中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸的含量，该方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，保证了本品的质量稳定均一性及疗效；本发明的方法简单、专属性强、重现性好，有效的保障了长春西汀注射液的质量和疗效，具有很强的实用性。

说明书

技术领域

本发明涉及医药质量检测领域，特别涉及一种注射液中有关物质长春胺酸与阿朴长春胺酸的检测方法。

背景技术

长春西汀(Vinpocetine，简称VIN)，化学名为：乙基(13aS,13bS)-13a- 乙基-2,3,5,6,13a,13b-六氢-1H-吲哚[3,2,1-de]吡啶并[3,2,1-ij][1,5]二氮杂萘-12-羧酸。

本品最早由匈牙利药物公司Cedeon Richter于1978年研发上市，主要用于治疗心脑血管疾病、缺血性高血压脑病、脑动脉硬化、脑局部缺血、间歇式脑血流供应不足、脑血管痉挛、脑血栓、衰老所致的脑部疾病等病症。

本品化学结构为：

参考中国药典2015年版中相关的品种，参照上述质量标准，也采用高效液相色谱法，以等度洗脱方式，已知杂质按照外标法以峰面积计算已知杂质含量，未知杂质按主成分自身对照法测定本品的未知杂质含量，同时，因增加合成起始原料、合成中间体及查询到的相关杂质的研究，故在原申报标准中有关物质的检测方法的基础上重新进行有关物质的方法学研究，经过有关物质方法学研究发现，长春西汀合成中间体长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸在原有关物质的检测方法中无法分离，故急需一种检测方法，解决上述问题。

发明内容

鉴于此，本发明提出一种注射液中有关物质长春胺酸与阿朴长春胺酸的检测方法，本发明方法简单、分离度好、专属性强、重现性好，有效的保障了长春西汀注射液的质量和疗效，具有很强的实用性。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种注射液中有关物质长春胺酸与阿朴长春胺酸的检测方法，采用高效液相色谱法对长春西汀注射液中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸进行定量鉴别，色谱条件为：色谱柱的填充剂为氰基硅烷键合硅胶，流速为0.5-0.7mL·min-1，柱温为30～34℃，以体积比为30～65∶65～70的0.1mol/L～0.25mol/L三乙胺溶液和乙醇为流动相。

进一步的，检测溶液配制方法如下，包括以下步骤：

(1)供试品溶液配制：

取长春西汀注射液样品，以流动相为稀释剂，配制成供试品溶液，每1ml 中含长春西汀0.8-1.2mg，优选1.0mg；

(2)杂质对照品溶液：

取杂质长春胺酸、杂质阿朴长春胺酸对照品，以流动相为稀释剂，配制成杂质对照品溶液，每1ml中分别含长春胺酸1.6-2.4μg、阿朴长春胺酸1.6-2.4μg，优选2.0μg；

(3)系统适用性试验溶液：

取长春西汀对照品，以步骤(2)的杂质对照品溶液为稀释剂，配制成系统适用性试验溶液，每1ml中含长春西汀0.8-1.2mg，优选1.0mg。

进一步的，所述色谱柱为ECOSIL CN色谱柱。

进一步的，所述色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5μm。

进一步的，检测波长280nm。

进一步的，所述进样量15～20μL。

进一步的，流速为0.6mL·min-1。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

(1)本发明利用高效液相色谱法，采用特定配方流动相结合特定色谱条件，测定长春西汀注射液中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸的含量，检测方法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，保证了本品的质量稳定均一性及疗效；

(2)本发明的质量控制方法简单、专属性强、重现性好，有效的保障了长春西汀注射液的质量和疗效，具有很强的实用性。

附图说明

图1为本发明长春西汀注射液含量测定中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸对照品的高效液相色谱图(扫描图)；

图2为本发明长春西汀注射液含量测定中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸供试品的高效液相色谱图(扫描图)；

图3为长春胺酸峰面积与浓度的线性关系图；

图4为阿朴长春胺酸峰面积与浓度的线性关系图。

具体实施方式

为了更好理解本发明技术内容，下面提供具体实施例，对本发明做进一步的说明。

本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明所采用的长春西汀注射液由海南葫芦娃药业集团有限公司生产。

实施例1

(一)杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸含量测定

(1)精密量取长春西汀注射液适量，用流动相定量稀释制成每1ml中约含长春西汀1.0mg的溶液，作为供试品溶液；

(2)取杂质长春胺酸、杂质阿朴长春胺酸对照品各适量，精密称定，加入流动相溶解并定量稀释制成每1ml中各约含杂质长春胺酸、杂质阿朴长春胺酸2μg的混合溶液，作为杂质对照品溶液；

(3)取长春西汀对照品10mg，置10ml量瓶中，用杂质对照品溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性试验溶液；

(4)取系统适用性试验溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，出峰顺序依次为杂质Ⅷ峰、杂质Ⅸ峰、长春西汀峰，各峰间的分离度均应符合要求。

(5)吸取上述对照品溶液与供试品溶液，分别注入液相色谱仪进行测定，供试品溶液的色谱图中如有与杂质Ⅷ、杂质Ⅸ峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，长春酸胺与阿朴长春胺酸均不得过标示量的0.2％。

上述色谱条件为：色谱柱的填充剂为氰基硅烷键合硅胶(ECOSIL CN， 4.6mm×250mm，5μm)，流速为0.6mL·min-1，柱温为30℃，检测波长为280nm，进样量20μL，以体积比为35∶65的0.25mol/L三乙胺溶液和乙醇为流动相。

本发明长春西汀注射液含量测定中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸对照品的高效液相色谱图如图1所示；

本发明长春西汀注射液含量测定中杂质长春胺酸与杂质阿朴长春胺酸供试品的高效液相色谱图如图2所示。

上述步骤(一)中，对HPLC进行方法学考察，具体分析如下：

1、线性关系

试验结果表明，如图3-4所示，长春胺酸在0.554～8.861μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度成良好的线性关系、阿朴长春胺酸在0.441～7.056μg/ml浓度范围内，峰面积与浓度成良好的线性关系。

2、专属性

各破坏性试验降解产物峰与主峰均能有效分离，辅料空白无降解杂质产生，不干扰有关物质测定。且在各破坏条件下，长春西汀注射液原研上市样品以及研制样品物料均达到守衡。通过对各破坏性试验中主峰的峰纯度相似度均大于 0.999，表明主峰为单一物质峰，说明本发明的检测方法专属性良好。

实施例2-本实施例与实施例1区别在于，以体积比为30∶70的0.25mol/L 三乙胺溶液和乙醇为流动相。结果显示长春西汀、长春胺酸与阿朴长春胺酸的峰形良好。

实施例3-本实施例与实施例1区别在于，以体积比为1∶1的0.1mol/L三乙胺溶液和乙醇为流动相。结果显示长春西汀、长春胺酸与阿朴长春胺酸的峰形良好。

实施例4-本实施例与实施例1区别在于，柱温34℃。结果显示长春西汀、长春胺酸与阿朴长春胺酸的峰形良好。

实施例5-本实施例与实施例1区别在于，流速为0.5mL·min-1。结果显示长春西汀、长春胺酸与阿朴长春胺酸的峰形良好。

实施例6-本实施例与实施例1区别在于，流速为0.7mL·min-1。结果显示长春西汀、长春胺酸与阿朴长春胺酸的峰形良好。

对比例1-本对比例与实施例1区别在于，色谱柱替换为Exformma C18柱。结果显示长春胺酸峰与阿朴长春胺酸峰相互干扰。

对比例2-本对比例与实施例1区别在于，流速为1mL·min-1，结果显示长春胺酸峰与阿朴长春胺酸峰相互干扰。

对比例3-本对比例与实施例1区别在于，柱温28℃，结果显示长春胺酸峰与阿朴长春胺酸峰相互干扰。

对比例4-本对比例与实施例1区别在于，以体积比为40:60的0.2mol/L醋酸铵溶液和乙腈为流动相。结果显示长春胺酸峰与阿朴长春胺酸峰相互干扰。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。