大鼠背部毛乳头细胞的分离培养和鉴定

摘要

目的:建立一种高效分离成年SD大鼠背部毛乳头细胞(DPCs)的方法,考察DPCs在体外培养条件下的生长特性.方法:采用改良二步酶消化法分离大鼠背部DPCs,应用相差显微镜进行形态学观察,流式细胞技术检测细胞周期,细胞计数法绘制生长曲线,流式细胞技术和免疫细胞化学法检测细胞表面分子标志.结果:分离培养的DPCs多呈短梭形,融合前细胞呈现凝集性生长趋势;传代细胞呈多角形或短梭形,传代后第3天开始呈对数生长,第9天达增殖高峰.第1、3、5代的细胞增殖时间分别为68、52和36 h.流式细胞仪检测第1、3、5代细胞周期,处于G0／G1期分别为(90.21±5.13)％、(81.23±1.85)％和(75.16±5.32)％,随着传代次数的增加,G0／G1期细胞比例逐渐下降,但仍大部分处于静止期;经免疫化学SABC法染色显示,α-SMA抗体表达阳性,CK抗体表达阴性,细胞表面分子表达CD44、CD90,但不表达CD34.结论:改良二步酶消化法能成功分离培养成年SD大鼠背部DPCs,体外培养的DPCs与干细胞的生物学特性相吻合,有望成为一种新的细胞替代疗法的种细胞来源.