女贞种质资源ISSR分析与抗寒优株选育

摘要

[目的]筛选山东及其周边区域抗寒性状稳定的女贞优株.[方法]对来自不同地区的60份女贞种质进行连续7 a的大田抗寒表型观测,并对其进行分类.采用石蜡切片法,观察并比较初选越冬叶片保有率较高与叶片保有率较低的种质叶片解剖结构的差异.初冬,选取1年生枝为材料,在不同低温条件下处理后测定相对电导率,拟合Logistic方程,计算低温半致死温度.采用CTAB法,提取女贞幼叶基因组DNA,利用ISSR分子标记技术对女贞的基因组DNA进行多态性扩增,使用POPGENE软件计算引物的多态性指标,使用NTSYS软件进行种质间的UPGMA聚类分析.[结果]根据大田抗寒观测结果,将女贞抗寒表现由强到弱分为Ⅰ～Ⅴ级.越冬叶片保有率较高的女贞叶片的栅栏组织细胞排列更紧密,栅栏组织和海绵组织厚度的比值更高.女贞的低温半致死温度为-15.1～-4.2°C,其中A4的低温半致死温度最低.从96条引物中筛选出9条条带清晰多态性强的引物,共扩增出2013条带,多态性比率100％,Nei's基因多样性指数为0.1163～0.1721;Shannon信息指数为0.2060～0.2953,在遗传相似系数0.298处60份女贞种质可分为抗寒性较强和较弱2类种质.[结论]优株A4的抗寒性强且稳定,是良好的抗寒女贞育种材料.供试女贞材料的ISSR聚类结果可反映其亲缘关系,也表明不能按照优株地理距离聚类.ISSR聚类结果与抗寒性表现相符,暗示亲缘关系近的女贞种质具有相似的抗寒表现.