膀胱癌细胞中锌指蛋白A20对核转录因子kB抑制的机制探讨

摘要

目的为了探讨锌指蛋白A20在膀胱癌细胞中抑制核转录因子κB(Nuclear Transcription Factor KappaB,NF-κB)作用的可能机制.方法转染绿色荧光蛋白融合的A20质粒(Green FluorescentProtein fusedA20,GFP-A20)和A20显性失活突变体质粒[GFP-A20(1-368)]人膀胱癌细胞T24,荧光显微镜观察质粒在细胞中表达情况,RT-PCR检测肿瘤坏死因子受体Ⅰ(Tu-mor Necrosis Factor ReceptorⅠ,TNFRⅠ)、核转录因子κB受体激活子配体(Receptor Activator of NF-κB Ligand,RANKL)、NF-κB抑制蛋白ⅠκBα的mRNA表达变化.结果转染24 h后,质粒在细胞中稳定表达,48 h后表达继续增加.转染A20质粒或A20显性失活突变体质粒24 h及48 h后,TNFRⅠ和RANKL mRNA表达无明显变化(P＞0.05).而在这两个时间点处,A20质粒转染可明显抑制细胞内ⅠκBαmRNA的表达;A20质粒处理组与未处理组之间、A20质粒转染组与显性失活突变体质粒转染组之间差异均有显著性(P＜0.01).结论A20作用于TNFR的下游对NF-κB起抑制作用,ⅠκBαmRNA可能作为NF-κB报告基因受A20抑制.