补肾养精颗粒灌胃对早发性卵巢功能不全大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用及其机制

摘要

目的观察补肾养精颗粒对早发性卵巢功能不全(POI)大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法取雌性SD大鼠90只,随机分为空白组15只和模型组75只,模型组采用雷公藤多苷灌胃方法制备POI模型,空白组给予0.9%氯化纳注射液灌胃,每天1次,连续14 d。造模结束后,将模型组分为模型对照组、补佳乐组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组,每组各15只。补佳乐组给予0.1 mg/(kg·d)补佳乐灌胃,中药低、中、高剂量组分别给予补肾养精颗粒1.75、3.5、7.0 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型对照组给予0.9%氯化纳注射液2 mL/d灌胃,连续给药15 d。给药结束后24 h,每组分别取6只大鼠给予孕马血清促性腺激素(PMSG)50 IU皮下注射,48 h后处死,取双侧卵巢,流式细胞定量分析法检测卵巢颗粒细胞的凋亡状态。各组剩余9只大鼠取双侧卵巢,透射电子显微镜下观察卵泡的超微化结构;取卵巢组织,采用Westernblotting法检测Hedgehog信号通路关键基因Shh、Ptch1、Gli1及凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达。结果与空白组比较,模型对照组颗粒细胞早期凋亡率及晚期凋亡率均升高,正常细胞比例降低;与模型对照组比较,各治疗组颗粒细胞晚期凋亡率降低,正常细胞比例增加;中药高剂量组颗粒细胞早期凋亡率较其他剂量组降低;中药中、高剂量组颗粒细胞晚期凋亡率较中药低剂量、补佳乐组降低,正常细胞比例增加(P<0.05或<0.01)。与空白组比较,模型对照组见卵母细胞形态欠规则,细胞核固缩,颗粒细胞形态欠规则,见凋亡相,细胞器结构异常且数量偏少。与模型对照组比较,各治疗组细胞器形态改善或恢复正常,数量增多,卵母细胞及颗粒细胞形态改善,其中中药中、高剂量组卵母细胞形态基本接近空白组。模型大鼠卵巢组织中Shh、Ptch1、Gli1以及Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高;各治疗组卵巢Shh、Ptch1、Gli1及Bcl-2蛋白表达均升高,Bax蛋白表达均降低;中药中、高剂量组Shh、Gli1蛋白表达水平较中药低剂量组、补佳乐组升高(P<0.05或<0.01)。结论中、高剂量补肾养精颗粒可明显抑制POI大鼠卵巢颗粒细胞凋亡,其机制可能与激活Hedgehog信号通路后下调促凋亡基因、上调抑凋亡基因表达有关。