亚砷酸钠对人肝星状细胞活化的影响及机制

摘要

目的探讨亚砷酸钠(NaAsO_(2))对人肝星状细胞(LX-2细胞)活化的影响及机制。方法体外培养LX-2细胞,取对数生长期LX-2细胞,分别加入浓度为0、5、15、20、30、40、50μmol/L的NaAsO_(2)培养液,用MTT法检测细胞活力并确定NaAsO_(2)实验浓度。取对数生长期LX-2细胞随机分为对照组及NaAsO_(2)低、中、高浓度组,分别用0、5、10、15μmol/L的NaAsO_(2)干预48 h。用透射电子显微镜观察细胞自噬变化,用Western blotting法检测细胞活化蛋白(ɑ-SMA)及自噬蛋白(AKT、Hes1、mTOR)表达。结果随着NaAsO_(2)染毒浓度的增加,细胞增殖抑制率逐渐升高;根据细胞半数抑制浓度及细胞活性选择5、10、15μmol/L为NaAsO_(2)实验浓度。对照组可观察到自噬小体、自噬溶酶体。NaAsO_(2)低、中、高浓度组细胞间隙逐渐增宽,观察到“假狄氏间隙”,自噬小体数量增加,脂滴的分布更加密集,可见部分线粒体肿胀、空泡化,大量线粒体嵴断裂;NaAsO_(2)高浓度组以上变化最为明显。与对照组比较,NaAsO_(2)低、中、高浓度组ɑ-SMA蛋白相对表达量逐渐升高(P均<0.05);AKT、mTOR蛋白表达逐渐降低,Hes1蛋白表达逐渐升高(P均<0.05)。结论NaAsO_(2)可诱导LX-2细胞活化,其机制可能与促进细胞自噬有关。