双酚A诱发卵巢储备功能下降大鼠模型的制备及其中医证候属性

摘要

目的探讨双酚A(BPA)诱发大鼠卵巢储备功能下降(DOR)模型的最佳制备方案,并明确其中医证候属性。方法选择动情周期规律的3、6月龄雌性清洁SD大鼠各18只,不同月龄分别按随机数字表法分为低、中、高剂量组。低、中、高剂量组每日分别给予50、100、200 mg/kg BPA混悬液灌胃,均每日灌胃1次,至大鼠动情周期紊乱。观察大鼠一般情况;阴道涂片观察大鼠动情周期;取大鼠腹主动脉血,分离血清,用ELISA法检测血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒氏管激素(AMH)、抑制素-B(INHB);取双侧卵巢,观察卵巢组织形态,测算各级卵泡比例、卵巢指数。选择观察指标变化最明显组所用的模型制备方法为最佳方法。将造模成功的18只大鼠按照随机数字表法分为对照组、右归丸组、养精种玉汤组,每组6只,分别给予蒸馏水、治疗肾阳虚的右归丸、治疗肾阴虚的养精种玉汤按1 mL/100 g体质量灌胃,连续2周。对比各组动情周期变化,肾阳虚症状,卵巢组织形态、卵巢指数、各级卵泡比例,血清激素、INHB、AMH水平。结果3、6月龄各BPA干预组大鼠活动减少,喜蜷卧扎堆。3月龄中剂量BPA组动情周期紊乱时间较其他组短;AMH水平最低,原始卵泡最少,闭锁卵泡最多,因此3月龄中剂量BPA组的模型制备方法最佳。模型组大鼠实验期间持续处于动情周期紊乱状态,养精种玉汤组大鼠有1只恢复规律动情周期,右归丸组有5只大鼠恢复规律动情周期。右归丸组大鼠规律动情周期恢复数量(5只)高于对照组(无)、养精种玉汤组(1只),肾阳虚症状明显改善。模型组大鼠卵巢苍白,体积变小,质硬;右归丸组大鼠卵巢颜色红润,体积变大,组织弹性好,表面有多个生长卵泡;养精种玉汤组大鼠卵巢表面生长卵泡少,组织弹性差。与对照组、养精种玉汤组比较,右归丸组大鼠原始卵泡比例高、闭锁卵泡比例低,AMH水平高(P均<0.05)。结论3月龄SD大鼠每日以100 mg/kg的BPA灌胃可成功制备DOR动物模型,以方测证表明该动物模型的中医证候属性为肾阳虚型。